藏红花球茎腐烂病的病原鉴定及药剂预防 

摘要：藏红花球茎腐烂病是贵州省种植基地的主要病害并造成了很大的经济损失，实验结果表明，该病害是由镰刀菌和炭疽菌引起的。笔者采用低毒、低残留杀菌剂即多菌灵(Bavistin)、百菌清(Daconil)、代森锰锌(Mancozeb)、甲基托布津(Top sin)进行药剂预防测定，结果表明多菌灵等能明显抑制或减轻腐烂病的发生。
关键词：藏红花；药剂预防；腐烂病；镰刀菌；炭疽菌
 
藏红花(Crocus sativus L.)又称番红花、西红花，撒馥兰等，属鸢尾科番红花属多年生草本植物。因花丝中含有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神、健胃等功效的成分，具有疏经活络、通经化淤、散淤开结、消肿止痛、凉血解毒、忧思郁结的作用，长期坚持服用可全面提高人体的免疫力的功效，故其具有较高的药用价值。此外，藏红花还可大量用于日用化工、食品、染料工业，是美容化妆品与香料制品的宝贵原料，球茎又可做为高档观赏花卉出售，因此，藏红花也具有较高的经济价值。在中国，已将其列入国家科技部重点开发项目，2002年又被国家中医药管理局列为重点发展的中药材品种。
球茎腐烂病是我国藏红花生产上的重要病害，贵州省凯里信邦药材公司首次引种一定规模的藏红花就遭到该病害的侵染造成了很大经济损失，随着种植面积的扩大，球茎腐烂病也日趋严重，从而影响了球茎和藏红花的产量和品质，为了减轻病害对藏红花品质、产量的影响，从而使其药用和观赏价值得以更好体现，也为了在生产各类名贵药材中更好地应用现代生物技术，本文对侵染藏红花球茎腐烂病的病原菌进行了病原鉴定及其药剂预防研究。
 
1 材料与方法
1.1 试验时间、地点
室外试验于2006年10月在凯里信邦药材公司药材基地进行，室内试验于2006年11在凯里学院进行。
1.2 供试材料和供试药剂
供试藏红花患病球茎由贵州省凯里信邦药材公司药材基地(室内)采集。
供试药剂为50%多菌灵WP(Bavistin)(无锡市农药有限公司)、75%百菌清WP(Daconil)(重庆易丰科技发展有限公司)、50%代森锰锌WP(Mancozeb)(西安近代农药有限责任公司)、70%甲基托布津WP(Top sin)(山东奥丰生物工程有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 实地调查 对贵州凯里信邦药材公司的藏红花进行实地调查，了解病害的种类、分布和为害状况。
1.3.2 症状的观察与描述 症状的观察主要是对病组织的表面病斑形态、病部颜色、病斑的大小等方面进行观察和描述。
1.3.3 显微镜检查 显微镜检查分为真菌病害标本和病原菌的显微镜检查两个方面，主要是观察菌丝体和其他营养体的结构、孢子的形态和着生方式、子实体的形态结构和产生部位等。同时，对部分病菌在多媒体教室数码显微镜下拍摄照片，进行记录。
1.4 实验方法
1.4.1 培养基的制备 马铃薯蔗糖培养基(PSA)：马铃薯200g、蔗糖15～17g、琼脂17～20g、水1000g，121℃，灭菌30min。
1.4.2 病原菌的分离和培养 对病原真菌的分离采用组织表面分离法。先用70%的酒精对藏红花球茎病害的病斑部进行表面消毒处理，再轻过火焰一下，然后切去表皮，切取内部病健交界处的小块组织，移入PSA平板内培养基上，28～30℃条件下培养3～4d。待培养皿内病组织的周围长出菌丝体后，挑取先端菌丝，分别移置到新的PSA培养基上，依次重复多次，无菌条件下镜检是否获得纯培养，直至得到纯的病原菌进行纯培养，之后待菌落长出后挑取前缘菌丝，回接于牛肉膏蛋白胨和PSA斜面培养基上，在28℃温箱中培养，作为备用。
1.4.3 病原菌的鉴定 将纯化后的菌株点植于PSA培养基上，观察培养性状，镜检形态特征，测量其菌落生长速度，根据陈鸿逵、王拱辰的浙江镰刀志以及柏斯(Booth.1978)的镰刀菌鉴定方法，挑取培养一定时间的菌落，在显微镜下观察各种类型的孢子形态，并查阅文献作病原菌鉴定，同时，对部分病菌在多媒体教室数码显微镜下拍摄照片，进行记录。
1.4.4 药剂对病原菌的抑制测定 本试验在PSA培养基上进行，共5个处理，每个处理重复3次。选取国内外常用杀菌剂:多菌灵(Bavistin)、百菌清(Daconil)、代森锰锌(Mancozeb)、甲基托布津(Top sin)，稀释至1000倍，然后向培养皿内移入1ml药液，再加9ml已灭菌的培养基混匀。用于对照的培养皿内加无菌水1ml，再加9ml已灭菌的培养基混匀即可。移接一枚直径为5mm的菌苔置于平皿中央，28℃倒置培养2d后，测量菌落直径，重复3次求平均值;并计算药剂对菌落生长的相对抑制率。
 
2 结果与分析
2.1 症状观察与描述
带菌球茎出芽时，芽头上出现黄褐色水渍状斑点，气温高湿度大时扩展很快，引起芽头腐烂而死亡。大田栽培根、球茎盘染病时产生黄褐色凹陷斑，边缘不整齐，后腐烂，鳞茎皱缩干腐。病斑椭圆形，略凹陷，病健交界很明显，大小为10～30mm。病斑部有灰黑色霉层，边缘呈浅红色，幼芽呈弯曲、倒塌(正常的植株的幼芽呈直立)
2.2 病原菌鉴定
对罹病球茎的致病菌进行分离和鉴定，藏红花球茎腐烂病由炭疽菌和镰刀菌的交互侵染导致。鉴定结果为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecbt)，另外，还分离到一种炭疽菌，也为致病菌。通过实验鉴定表明，菌落前期的镰刀菌数量比炭疽菌多，因此，前期藏红花腐烂病主要是镰刀菌，而后期的炭疽菌入侵会加重病害的蔓延。
炭疽菌(Anthracnose sp)的分生孢子体型较小，两头钝圆，单胞无色，椭圆型，每个孢子有2个油球，菌丝无色、无隔膜；镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecbt)的分生孢子体型较大，两头向内侧稍弯曲，细长，呈新月形或镰刀形，一般都有2～4个隔膜。菌丝无色、有隔膜
2.3 药剂对病菌的抑制测定
杀菌剂对致病的镰刀菌和炭疽菌有较好的抑制作用，本实验的药剂主要用于预防作用且不影响到药材生产和销售，故以杀灭、抑制病菌和保护作用为机理，选择和采用低毒、低残留杀菌剂用于病害的预防。
4种杀菌剂对镰刀菌、炭疽菌菌丝生长的抑制作用测定如下，见表1所示。
藏红花
杀菌剂对镰刀菌、炭疽菌菌丝生长的抑制作用测定结果表明，供试的4种药剂对致病的镰刀菌、炭疽菌都具有抑制作用。其中，多菌灵的抑制作用最强。如：表2所示，抑菌率公式为：抑菌率=[(对照菌落直径-5)-(处理菌落直径-5)]/(对照菌落直径-5)×100%。
藏红花
3 讨论
3.1 镰刀菌和炭疽菌交互侵染是引起藏红花球茎腐烂病的主因
藏红花球茎腐烂病发生极为普遍，凯里信邦药材公司引种的藏红花发病率高达70%左右，对该公司造成了很大的经济损失，尤其在发芽有4～7cm时发病率最高。根据调查和研究，藏红花球茎腐烂病主要是由镰刀菌和炭疽菌交互侵染所引起的，前期主要是由镰刀菌侵染，而后期的炭疽菌入侵会加重病害的蔓延。根据炭疽菌具有潜伏侵染这一特征，我们可以知道炭疽菌是在镰刀菌的基础上加重藏红花腐烂病。因此藏红花腐烂病主要是由镰刀菌和炭疽菌交互侵染引起的。
3.2 环境因素和人为因素对藏红花病害发生的影响
藏红花生长期是秋季的8月～10月，在这个时期，炭疽菌和镰刀菌正是频发期，而且藏红花幼种的免疫能力差。因此，在栽种藏红花幼种时，我们对藏红花的幼种要进行严格的消毒和对它生长环境要有严格的要求，如温度、光照、通风程度、和土壤的酸碱度等等。在对信邦药材公司进行调查时，信邦药材公司的管理人员说到，在他们发现藏红花腐烂病时，他们认为是由细菌病害引起，他们就利用含铜的试剂进行消毒。而藏红花的腐烂病是属于真菌病害，含铜试剂对真菌病害根本不起作用，因此，由于人为因素的原因，也间接造成了该公司巨大的经济损失。
3.3 探讨藏红花球茎腐烂病的预防措施
藏红花属亚热带植物，喜温和、凉爽，怕炎热，较耐寒。土壤以肥沃的沙质土为好，忌积水，合理的生态环境可以减少病菌的数量及生存。藏红花无种子，以球茎繁殖，在球茎栽种前，经过药剂处理，可防止病危害，藏红花主要病害就是球茎腐烂病，选用低毒、低残留的农药是药材公司的最佳选择，跟据本次实验表明，多菌灵的效果显著强于其他几种农药，多菌灵是一种高效低毒内吸性杀菌剂，可以影响病菌的细胞分裂，从而限制病菌的繁殖和危害，多菌灵具有保护和治疗的作用。因此可用它来作处理球茎的药剂，即可用多菌灵杀菌剂浸种。为了增强预防效果，也可采用多菌灵与其它杀菌剂合用的方法。一般用25%多菌灵500倍液与三氯杀螨醇或乐果3000倍液，两种药液混合，浸种20分钟，立即下种，病害预防的效果较为显著。